Оценка жизнеспособности сперматозоидов

Оценка жизнеспособности сперматозоидов проводится следующим образом: после разжижения сперма перемешивается пипеткой, далее на предметное стекло помещается капля неразведенного эякулята. На препарат наносится 1% водный раствор эозина.
Лучшим методом окраски считается окраска по Блуму. На предметное стекло рядом с каплей спермы помещают вдвое большую каплю 5% раствора эозина и каплю 10% водного раствора нигрозина, вдвое большую, чем капля эозина. Сначала эякулят смешивают с каплей эозина, выжидают несколько секунд. Далее препарат смешивают с каплей нигрозина и снова выжидают. После чего делается мазок, аналогичный мазку крови. После высушивания приступают к микроскопии.
Препарат накрывается обычным покровным стеклом и через 2 минуты микроскопируется при увеличении 400х (объектив 40х, окуляр 10х). Конденсор микроскопа вначале опускается. Поскольку живые сперматозоиды не окрашиваются, а мертвые окрашиваются в розовый цвет, то достаточно просто их отличить друг от друга. Подчитывается общее число сперматозоидов в поле зрения (желательно не менее 500). Далее конденсор поднимается и ведется подсчет мертвых сперматозоидов. Процентное содержание мертвых сперматозоидов определяется по формуле: Cмертв. = C розовые / C общие и выраженное в процентах (х 100%).
В норме число живых сперматозоидов должно быть более 75%, однако мы неоднократно наблюдали наступление беременности и при меньших значениях. Повышение числа мертвых сперматозоидов свыше 25% носит название – некрозооспермия. Причины появления мертвых сперматозоидов различны и до конца не выяснены. Возможно, что это связано с патологией придатка яичка.
Иногда используется индекс нормальных подвижных сперматозоидов (ИНПС) определяется по формуле: ИНПС = V х C х A х B / 10 в 6 степени, где V – это объем эякулята, C – концентрация сперматозоидов, A – процент сперматозоидов с прогрессивной подвижностью (a +b) и B – процент морфологически нормальных сперматозоидов. Если значения индекс нормальных подвижных сперматозоидов больше или равен 6 на 10 в 4 степени, то это говорит о нормальной фертильности.